Oxytetracyclin Dihydrat

Oxytetracyclin dihydrat là (4S,4aR,5S,5aR,6S,12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,6,10,12,12a-hexahydroxy-6-methyl,1,11-dioxo-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracen- 2-carboxamid dihydrat, phải chứa từ 94,5 % đến 102,0 % C₂₂H₂₄N₂O₉, tính theo chế phẩm khan.

Chế phẩm thu được từ quá trình nuôi cấy một số chủng Štreptomyces rimosus.

1 Tính chất

Bột kết tinh vàng. Dễ tan trong nước, hơi tan trong Ethanol 96 %. Dung dịch trong nước vẩn đục khi để yên oxytetracycline kết tủa.

2 Định tính

Có thể chọn một trong hai nhóm định tính sau:

Nhóm I: B,C, D

Nhóm II: A,C, D

A. Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4).

Bản mỏng: Octadecylsilyl silica gel F₂₅₄

Dung môi khai triển: Acetonitril - methanol- dung dịch acid oxalic 6,3 % đã được điều chỉnh đến pH 2,0 bằng amoniac (20: 20 : 60).

Dung dịch thử: Hòa tan 5 mg chế phẩm trong methanol (TT), pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.

Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan 5 mg oxytetracyclin hydroclorid chuẩn trong methanol (TT) và pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.

Dung dịch đối chiếu (2): Hòa tan 5 mg oxytetracyclin hydroclorid chuẩn, 5 mg tetracyclin hydroclorid chuẩn và 5 mg minocyclin hydroclorid chuẩn trong methanol (TT), pha loãng thành 10 ml với cùng dung môi.

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 1 µl  mỗi dung dịch trên. Triển khai sắc ký đến khi dung môi đi được 3/4 bản mỏng. Lấy bản mỏng ra, để khô trong không khí, kiểm tra dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254 nm. Vết chính trên sắc ký đồ của dung dịch thử phải tương ứng về  vị trí và kích thước với vết chính trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (1). Phép thử chỉ có giá trị khi trên Sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (2) cho ba vét tách ra rõ ràng.

B. Trong mục Tạp chất liên quan, pic chính trên sắc ký đồ của dung dịch thử (2) phải có thời gian lưu và kích thước tương tự với thời gian lưu và kích thước của pic chính trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (1).

C. Thêm 5 ml acid sulfuric (TT) vào 2 mg chế phẩm, màu đỏ đậm tạo thành. Thêm dung dịch thu được vào 2,5 ml nước, màu chuyển sang màu vàng.

D. Nước: Từ 6,0% đến 9,0% (Phụ lục 10.3).

3 pH

Từ 4,5 đến 7,5 (Phụ lục 6.2).

Lắc kỹ để phân tán 0,1 g chế phẩm trong 10 ml nước không có carbon dioxyd (TT).

4 Tạp chất hấp thụ ánh sáng

Đo độ hấp thụ của các dung dịch trong vòng 1 h kể từ khi bắt đầu chuẩn bị dung dịch (Phụ lục 4. 1).

Hòa tan 20,0 mg chế phẩm trong hỗn hợp gồm dung dịch acid hydrocloric 1 M - methanol (1: 99) và pha loãng thành 10,0 ml với cùng dung môi. Độ hấp thụ của dung dịch (Phụ lục 4.1) tại bước sóng 430nm không được lớn hơn 0,25 (tính theo chế phẩm khan).

Hòa tan 0,100 g chế phẩm trong hỗn hợp dung dịch acid hydrocloric 1 M - methanol (1 : 99) và pha loãng thành 10,0 ml với cùng dung môi. Độ hấp thụ của dung dịch (Phụ lục 4.1) tại bước sóng 490 nm không được lớn hơn 0,20 (tính theo chế phẩm khan).

5 Tạp chất liên quan

Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3).

Pha động A: Dung dịch acid trifluoroacetic (TT) 0,05 % (tt/tt).

Pha động B: Tetrahydrofuran dùng cho sắc ký - methanol - acetonitril (5 : 15 : 80).

Chuẩn bị các dung dịch sau ngay trước khi dùng.

Dung dịch thử (1): Hòa tan 20,0 mg chế phẩm trong dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT) và pha loãng thành 25,0 mÏ với cùng dung môi.

Dung dịch thử (2): Pha loãng 5,0 ml dung dịch thử (1l) thành 50,0 ml | bằng dung dịch acid hydrochloric 0,01 M (TT).

Dung dịch đối chiếu (1): Hòa tan 20,0 mg oxytetracyclin chuẩn trong dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT) vì pha loãng thành 25,0 ml với cùng dung môi. Pha loãng 5,0 ml dung dịch thu được thành 50,0 ml bằng dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT).

Dung dịch đối chiếu (2): Pha loãng 1,0 ml dung dịch thử (1)  thành 100,0 ml bằng dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT).

Dung dịch đối chiếu (3): Hòa tan 4,0 mg oxytetracyclin chuẩn dùng để kiểm tra tính phù hợp của hệ thống (có chứa các tạp chất A, B, C, D và E) trong dung dịch acid hydrocloric 0,01 M (TT) và pha loãng thành 5,0 ml với cùng dung môi.

Điều kiện sắc ký:

Cột kích thước (15 cm x 4,6 mm) được nhồi pha tĩnh end-capped octylsilyl silica gel dùng cho sắc ký (5 µm).

Nhiệt độ cột: 50 %.

Detector quang phổ tử ngoại đặt ở bước sóng 254 nm.

Tốc độ dòng: 1,3 ml/min.

Thẻ tích tiêm: 10 µl.

Cách tiến hành:

Tiên hành sắc ký theo chương trình dung môi như sau:

Tiến hành sắc ký với dung dịch thử (1), dung dịch đối chiếu (2) và (3).

Sử dụng sắc ký đồ cung cấp kèm theo oxytetracyclin chuẩn dùng kiêm tra tính phù hợp của hệ thống và sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (3) để xác định pic của các tạp chất A, B,C, D và E.

Thời gian lưu tương đối so với oxytetracyclin (thời gian lưu khoảng 6,5 min): Tạp chất A khoảng 0,9: tạp chất B khoảng 1,2; tạp chất C khoảng 1,3; tạp chất D khoảng 1,4; tạp chất E khoảng 2,3.

Kiểm tra tính phù hợp của hệ thống: Trên sắc ký đồ của dung dịch đối chiếu (3), tỷ số đỉnh - hõm (H_p/H_v) ít nhất là 3,0; trong đó H_p là chiều cao đỉnh pic của tạp chất A so với đường nên và H_v là chiều cao tính từ đường nên lên đến điểm thấp nhất của đường cong tách pic của tạp chất A khỏi pic của oxytetracycline; và tỷ số này cũng ít nhất là 3,0 khi H_p là chiều cao đỉnh pic của tạp chất B so với đường nền và H_v là chiều cao tính từ đường nền lên đến điểm thấp nhất của đường cong tách pic của tạp chất B khỏi pic của oxytetracyclin. 

Tính hàm lượng phần trăm các tạp chất dựa vào nồng độ của oxytetracyclin trong dung dịch đối chiếu (2). Nhãn diện tích pic tạp chất D và E với hệ số hiệu chỉnh là 0,4.

Giới hạn:

Tạp chất C: Không được quá 2,0 %.

Tạp chất B: Không được quá 1,0 %.

Tạp chất A: Không được quá 0,7 %.

Tạp chất D, E: Không được quá 0,2 %.

Các tạp chất khác: Với mỗi tạp chất, không được quá 0,1 %.

Tổng các tạp chất: Không được quá 3,5 %.

Bỏ qua các tạp chất có hàm lượng dưới 0,05 %.

Ghi chú:

Tạp chất A: (4R,4aR,5S,5aR,6S, 12aS)-4-(dimethylamino)-3,5,6,10,12,12a-hexahydroxy-6-methyl-1, 11-dioxo-1 ,4,4a,5,5a,6,11,12a-octahydrotetracen-2-carboxamid (4-epioxytetracyclin).

Tạp chất B: (4S.4aS,5aS,6,12a5)-4-(dimethylamino)-3,6,0,12,12a-pentahydroxy-6-methyl-l,11-dioxo-1,4,4a,5,5a,6,11, 12a-octahydrotetracen-2-carboxamid (tetracyclin).

Tạp chất C: (4S,4aR,5aS,5aR,65S, 12a5)-2-acetyl-4-(dimethylamino)-3,5,6,10,12,12a-hexahydroxy-6-methyl-4a,Sa,6, 12a-tetrahydro.-tetracen-l,11(4H,5H)-dion(2-acetyl-2-decarbamoyloxytetra-cyclin).

Tạp chất D: (3S,4S,5S)-4-[(1R)-4,5-dihydroxy-9-methyl-3-oxo.-1,3-dihydronaphtho[2,3-c]furan- 1 -yl]-3-(dimethylamino)-2,5- dihydroxy-6-oxocyclohex- 1-en- 1-carboxamid.

Tạp chất E: (3S,4S,5R)-4-[(LR)-4,5-dihydroxy-2-methyl-3-oxo-1,3-dihydronaphtho[2,3-c]furan-I-yl]-3-(dimethylamino)-2,5-dihydroxy-6-oxocyclohex-1-en-1-carboxamid.

6 Nước

Từ 6,0 % đến 9,0% (Phụ lục 10.3).

Dùng 0,250 g chế phẩm.

7 Tro sulfat

Không được quá 0,2 % (Phụ lục 9.9, phương pháp 2).

Dùng 1,0 g chế phẩm.

8 Định lượng

Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3).

Điều kiện sắc ký như mô tả trong phần Tạp chất liên quan. Tiến hành sắc ký với dung dịch thử (2) và dung dịch đối chiếu (1).

Tính hàm lượng phần trăm của C₂₂H₂₅CIN₂O₉, trong chế phẩm dựa vào diện tích pic chính thu được trên sắc ký đồ của dung dịch thử (2), dung dịch đối chiếu (1) và hàm lượng C₂₂H₂₅CIN₂O₉ của oxytetracyclin chuẩn. 

9 Bảo quản

Trong đồ đựng kín, tránh ánh sáng.

10 Loại thuốc

Kháng sinh 

11 Chế phẩm

Viên nén, nang.